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A suspeita clínica de síndrome de Cushing leva obrigatoriamente a uma avaliação laboratorial, baseada nas dosagens de cortisol e de ACTH (Hormônio Adenocorticotrófico). Na síndrome de Cushing de caráter endógeno é caracterizado por apresentar:
Cortisol baixo e ACTH baixo.
Cortisol elevado e ACTH elevado.
Cortisol baixo e ACTH elevado.
Cortisol elevado e ACTH baixo.
Cortisol baixo e ACTH normal.