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O teste de ELISA baseia-se em reações antígeno-anticorpo detectáveis por meio de reações enzimáticas. Para ser utilizada em imunoensaio, a enzima deve preencher alguns requisitos como: ser estável, facilmente obtida em forma purificada e ser facilmente conjugada a vários antígenos e anticorpos sem perda de sua atividade. Entre as enzimas, a mais empregada no teste é:
Aspartato aminotransferase.
Creatinofosfoquinase.
Lactase.
Fosfatase.
Peroxidase.