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A atividade de Cas9 exige motivo PAM e pareamento com o...
A atividade de Cas9 exige motivo PAM e pareamento com o gRNA, gerando quebras duplas (DSBs) reparadas por NHEJ ou HDR. Estudos de Jinek et al., 2012; Doudna & Charpentier, 2014; Tsai & Joung, 2016 discutem janelas de tolerância a mismatches e viés por NHEJ em somáticas. Qual assertiva permanece correta?
A
A ausência de PAM compatível é irrelevante, uma vez que Cas9 usa processividade helicase para inserir o motivo no locus alvo antes da clivagem.
B
A HDR supera NHEJ em frequência em somáticas, prescindindo de template exógeno, pois copia a fita complementar por reparo basal intrínseco.
C
A especificidade absoluta decorre de pareamento perfeito em qualquer região, sendo mismatches invariavelmente proibitórios em toda a extensão do gRNA.
D
O complexo Cas9-gRNA reconhece PAM compatível, cliva o DNA e aciona NHEJ predominante em células somáticas, com risco de off-target por tolerância limitada a mismatches na seed.
E
O controle regulatório encontra-se pacificado, com aplicações clínicas rotineiras e sem dilemas éticos remanescentes em germline ou gene drive.