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Em um laboratório de biologia molecular, um Biomédico está...
Ano:
2026
Em um laboratório de biologia molecular, um Biomédico está padronizando um ensaio de PCR em tempo real (qPCR) utilizando sondas TaqMan para a detecção de um patógeno respiratório. Durante a reação, ele observou que a fluorescência aumenta proporcionalmente à quantidade de DNA amplificado.
Sobre o princípio molecular desta técnica, assinale a afirmativa correta.
A
A sonda possui um fluoróforo e um quencher, e a atividade exonuclease 5'-3' da Taq polimerase cliva a sonda durante a extensão, gerando o sinal de fluorescência.
B
A sonda TaqMan atua como um primer iniciador e só emite a sua fluorescência quando se encontra intercalada na dupla fita de DNA recém-sintetizada.
C
O aumento da fluorescência ocorre porque a Taq polimerase tem atividade transcriptase reversa, que ativa o fluoróforo já ligado ao molde de RNA.
D
A sonda contém moléculas de SYBR Green que são clivadas por enzima de restrição, liberando energia luminosa proporcional ao número total de ciclos.
E
A atividade exonuclease 3'-5' da Taq polimerase degrada o quencher da sonda e mantém o fluoróforo intacto na fita molde para uma emissão contínua.