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A prática de biologia molecular encerra um conjunto amplo de protocolos padronizados e o uso de diferentes tecnologias disponibilizadas em equipamentos específicos. Dentre os equipamentos utilizados em experimentação de biologia molecular podemos apontar:
Espectrofotômetro; leitor de ELISA e microscópio óptico.
Termociclador tipo qPCR/RT-qPCR; transiluminador e freezer - 80C.
Termociclador tipo PCR; Sequenciador de nucleotídeos e Sistema de eletrofores em gel.
Cromatógrafo; espectropolalímetro de dicroismo celular e Sistema de eletroforese em gel.
Na técnica de PCR em Tempo Real (qPCR), o sistema que utiliza sondas de hibridização do tipo TaqMan baseia-se em qual princípio para emissão de fluorescência?
Intercalação da sonda na fenda menor da dupla fita de DNA.
Emissão por transferência de energia (FRET) após a hidrólise da sonda pela atividade exonuclease 5’ → 3’ da polimerase.
Ligação covalente da sonda ao primer de sentido reverso.
Mudança conformacional da sonda após o anelamento em temperaturas superiores a 72ºC.
Oxidação do fluoróforo pela ação do magnésio presente no tampão.
O fluxo da informação genética, conhecido como dogma central da Biologia Molecular, envolve processos altamente controlados de síntese de ácidos nucleicos e proteínas. Sobre o tema, assinale a alternativa correta.
A replicação gera cópias do DNA no núcleo; a transcrição converte a informação do DNA em RNA mensageiro (RNAm); e a tradução utiliza o RNAm nos ribossomos para a síntese de proteínas.
A replicação é o processo de síntese de uma molécula de RNA a partir de um molde de DNA, ocorrendo exclusivamente no citoplasma das células eucariontes durante a fase G1 do ciclo celular.
A transcrição consiste na cópia fiel do genoma para a formação de novas moléculas de DNA, utilizando a enzima DNA polimerase e ocorrendo integralmente no interior dos ribossomos.
A tradução é o processo de síntese proteica que ocorre no núcleo celular, em que o RNA transportador (RNAt) lê os íntrons do DNA para sequenciar os aminoácidos da nova cadeia polipeptídica.
Em células eucariontes, todos os processos de replicação, transcrição e tradução ocorrem obrigatoriamente dentro da mesma organela membranosa, garantindo a rapidez da expressão gênica.
Os ácidos nucleicos são macromoléculas responsáveis pelo armazenamento e transmissão da informação genética, apresentando diferenças estruturais que determinam sua estabilidade e função. Considerando as características químicas do Ácido Desoxirribonucleico - DNA e do Ácido Ribonucleico - RNA, analise as afirmativas a seguir.
I.O DNA possui a pentose desoxirribose e a base nitrogenada pirimídica timina, organizando-se geralmente em uma estrutura de dupla hélice antiparalela.
II.O RNA contém a base nitrogenada uracila no lugar da timina e apresenta o grupo hidroxila no carbono 2' da ribose, o que o torna mais suscetível à hidrólise.
III.As ligações fosfodiéster unem os nucleotídeos entre as bases nitrogenadas complementares através de pontes de hidrogênio estáveis no interior da molécula.
Está correto o que se afirma em:
I e II apenas.
III apenas.
I, II e III.
I e III apenas.
II apenas.
A tecnologia de edição gênica baseada em CRISPR-Cas revolucionou a biotecnologia ao permitir modificações precisas no DNA. Esse sistema deriva de um mecanismo adaptativo presente em bactérias, que reconhecem e neutralizam material genético de vírus invasores por meio de sequências específicas armazenadas em seu genoma. Com base nesse mecanismo natural e em seus fundamentos moleculares, assinale a alternativa correta:
O sistema CRISPR promove a integração do DNA viral ao genoma bacteriano como estratégia de neutralização da infecção.
As proteínas Cas atuam apenas na regulação da expressão gênica bacteriana, sem participação direta na defesa contra vírus.
As sequências armazenadas no genoma bacteriano codificam proteínas que bloqueiam a entrada de vírus, atuando diretamente na membrana celular.
O RNA guia, produzido a partir do lócus CRISPR, direciona proteínas Cas para sequências específicas de DNA invasor, permitindo sua clivagem.
O sistema CRISPR atua exclusivamente por meio da degradação inespecífica de ácidos nucleicos, impedindo a replicação viral sem necessidade de reconhecimento de sequência.
O fluxo da informação gênica, conhecido como dogma central da biologia molecular, compreende processos enzimáticos rigorosos de cópia e decodificação do material genético. No que diz respeito às enzimas e mecanismos envolvidos nestes processos, assinale a alternativa correta.
A transcrição é realizada pela enzima RNA polimerase, que utiliza as duas fitas de DNA simultaneamente como molde para sintetizar uma fita de RNA dupla.
A tradução inicia-se pela ligação da subunidade maior do ribossomo ao DNA genômico na região promotora TATA box localizada no compartimento citosólico.
A helicase é a proteína responsável por unir os fragmentos de Okazaki na fita descontínua através da formação de ligações de hidrogênio entre as desoxirriboses.
A DNA polimerase requer um iniciador de RNA, chamado primer, para iniciar a síntese da nova fita de DNA no sentido 5' para 3' durante a replicação.
A telomerase é uma enzima que promove a degradação dos terminais cromossômicos para evitar o envelhecimento celular precoce em células germinativas.
Assinale a alternativa que apresenta, respectivamente, a quantidade total de timinas e de pontes de hidrogênio de uma molécula de DNA constituída por 4000 pares de nucleotídeos e que, do total de bases nitrogenadas, 20% são de uma base púrica que necessita de 3 pontes de hidrogênio para se ligar à base correspondente.
2400 e 9600.
1200 e 4800.
1200 e 9600.
2400 e 4800.
1600 e 2400.
Os Sistemas de reparo de DNA corrigem lesões no material genético, evitando efeitos danosos na leitura e na tradução de proteínas. Nesse contexto, em relação ao tipo de reparo, à lesão e às enzimas adequadas, assinale a alternativa correta.
O reparo por excisão de nucleotídeos ocorre para corrigir formação de dímero de pirimidinas e entre as enzimas envolvidas estão XPG e ERCCI-XPF em seres humanos.
A síntese de DNA translesão ocorre para correção de sítio apurínico ou erros de replicação e as enzimas envolvidas são a RecA e RecB em E.coli.
O reparo de quebras de dupla fita ocorre para substituição de bases nitrogenadas danificadas e tem a participação da enzima DNA glicosilase.
Erros de pareamento durante a replicação ocorrem com participação das enzimas DNA polimerase e DNA glicosilase.
O reparo por excisão de bases ocasionado por danificação da base tem a participação da enzima DNA fotoliase.
No processo de replicação do DNA, a separação das fitas moldes ocorre pela clivagem das ligações de hidrogênio entre as bases nitrogenadas.
Qual enzima é responsável por romper as ligações de hidrogênio na molécula do DNA?
DNA Ligase
Topoisomerase
DNA Polimerase
Primase
DNA Helicase
Durante a análise molecular voltada à detecção de fungos fitopatogênicos, o técnico realizou uma eletroforese em gel de agarose para avaliar os produtos de amplificação por PCR. Na etapa de interpretação dos resultados, o pesquisador detalhou os princípios físico-químicos que regem a separação dos ácidos nucleicos.
Com relação à técnica que utiliza o gel de agarose, assinale a alternativa INCORRETA
O marcador molecular é utilizado como referência para estimar o tamanho dos fragmentos de DNA.
A presença de bandas bem definidas geralmente indica boa qualidade da amplificação.
O brometo de etídio e outros corantes intercalantes podem ser utilizados para visualização do DNA.
O gel deve ser submetido à corrente elétrica para promover a migração das moléculas.
A conformação do DNA não influencia sua velocidade de migração.
No diagnóstico de doenças de plantas, a quantificação e avaliação de pureza do DNA de fitopatógenos são etapas cruciais antes de prosseguir com reações de PCR. A análise é feita medindo a absorbância em espectrofotômetro de microvolume. Com base nessa técnica, assinale a alternativa CORRETA.
Para quantificar DNA de fita dupla, avalia-se a absorbância de 280nm, considerando que uma absorbância de 1,0 equivale a uma concentração de 50ng/µL.
Uma razão de absorbância de A260/A280 entre 1,8 e 2,0 indica uma amostra de DNA puro, livre de contaminações significativas por proteínas.
O padrão de referência utilizado para a leitura da concentração de DNA é em 230nm, pois o material genético absorve luz fortemente nessa faixa do ultravioleta.
Se a razão A260/A280 for muito inferior a 1,6, isso é um indicativo característico de alta pureza do DNA e total ausência de impurezas como polissacarídeos ou sais.
A espectrofotometria por absorbância UV permite quantificar o DNA independentemente da presença de RNA, visto que ambos exibem picos de absorbância em comprimentos de onda distintos.
Ao cultivar Escherichia coli em um meio de cultura contendo concentrações limitantes de dois carboidratos, glicose e lactose, observa-se um padrão de crescimento bifásico denominado curva de crescimento diaúxico. Nesse cenário, a bactéria consome preferencialmente a glicose e, somente após a sua exaustão e uma breve fase de adaptação (fase lag), inicia o consumo da lactose. Considerando os mecanismos moleculares de regulação metabólica envolvidos nesse processo, é correto afirmar que
a presença de glicose estimula a atividade da enzima adenilato ciclase, aumentando os níveis intracelulares de AMP cíclico (AMPc), o que é essencial para a ativação do operon lac.
a repressão catabólica ocorre porque a glicose impede a entrada de lactose na célula através da inibição direta da enzima β-galactosidase, que é degradada por proteases citoplasmáticas na presença de monossacarídeos.
o complexo formado pela proteína receptora de AMPc (CRP ou CAP) e pelo AMPc liga-se ao promotor do operon lac, facilitando a ligação da RNA polimerase; contudo, na presença de glicose, os níveis de AMPc são baixos, impedindo essa ativação mesmo que a lactose esteja presente.
o operon lac é um sistema constitutivo, ou seja, suas enzimas são sintetizadas em taxas constantes independentemente da fonte de carbono disponível, sendo a diauxia explicada apenas pela velocidade de transporte passivo da glicose.
a lactose atua como um corepressor, ligando-se à proteína repressora (LacI) e aumentando sua afinidade pelo operador, o que bloqueia a transcrição dos genes estruturais lacZ, lacY e lacA enquanto houver glicose no meio.
Estratégias baseadas em RNA têm sido amplamente utilizadas para modulação da expressão gênica em terapias modernas. Sobre os mecanismos moleculares de siRNA, miRNA e shRNA, assinale a alternativa correta.
O siRNA e miRNA apresentam complementaridade perfeita com seus alvos, resultando exclusivamente em clivagem do mRNA.
O miRNA atua apenas no núcleo, inibindo a transcrição gênica diretamente.
O shRNA é transcrito no núcleo e processado pela maquinaria celular para gerar siRNA funcional.
O siRNA atua exclusivamente em DNA genômico, impedindo a transcrição.
Durante a fase de otimização de uma reação de PCR quantitativa, um pesquisador avalia diferentes concentrações de Mg²+. Ele observa que concentrações elevadas aumentam o rendimento. Com isso em mente, podemos afirmar que:
Altas concentrações de Mg²+ aumentam a fidelidade da Taq DNA polimerase.
O Mg²+ não influencia a atividade da DNA polimerase.
A concentração de Mg²+ ideal é fixa para todas as reações de PCR.
O Mg²+ atua como cofator essencial, mas em excesso favorece amplificação inespecífica.
Nas modificações epigenéticas no DNA (ácido desoxirribonucleico) há
alteração da sequência do DNA.
mudanças de bases nitrogenadas.
mutações cromossômicas.
metilação do DNA.
Ao ingressar em um laboratório de procedimentos microbiológicos, o técnico de laboratório recebeu o treinamento adequado. Após esse período foi orientado a realizar a extração de DNA da bactéria Bacillus subtilis, utilizando as instruções descritas no Protocolo Operacional Padrão (POP). Sobre o POP é correto afirmar que:
É facultativo aos usuários do laboratório, incluindo o técnico, realizar os procedimentos seguindo o POP.
O POP deverá ter várias versões vigentes de um mesmo procedimento, ficando a critério do técnico a escolha de qual versão usar.
O POP deverá conter informações claras e inequívocas com revisão periódica, que permitam a execução de um procedimento técnico.
Para ter acesso ao POP de determinado procedimento é necessário aos usuários do laboratório a solicitação prévia do documento ao gestor do laboratório.
Durante a replicação do DNA, a enzima DNA polimerase catalisa a síntese das novas cadeias utilizando as fitas parentais como molde. Esse processo apresenta características específicas relacionadas à direção da síntese, à necessidade de um iniciador e à correção de erros durante a incorporação de nucleotídeos. Considerando as propriedades moleculares da DNA polimerase e o mecanismo de replicação do DNA, assinale a alternativa CORRETA.
A síntese de DNA ocorre no sentido 3' → 5', pois a enzima DNA polimerase necessita de uma extremidade 5' livre para adicionar novos nucleotídeos.
A DNA polimerase inicia a síntese de DNA diretamente sobre a fita molde e adiciona nucleotídeos na extremidade 5' da cadeia em crescimento.
A DNA polimerase reconhece erros durante a replicação, mas não possui capacidade de removê-los, sendo essa função exclusiva de outras enzimas do sistema replicativo.
A replicação semiconservativa caracteriza-se pela formação de duas moléculas-filhas compostas apenas por cadeias recém-sintetizadas.
A DNA polimerase adiciona nucleotídeos na extremidade 3' da cadeia em formação, razão pela qual a síntese da nova fita ocorre no sentido 5' → 3'.
A metilação do DNA consiste em uma modificação química que ocorre em determinadas bases nitrogenadas, podendo influenciar a expressão gênica sem alterar a sequência de nucleotídeos do DNA. Com base nesse processo, assinale a alternativa CORRETA.
Em células procarióticas, a metilação ocorre apenas em resíduos de citosina, não sendo observada em adenina.
Em células eucarióticas, a metilação do DNA ocorre predominantemente em resíduos de citosina, formando a 5-metilcitosina.
A metilação do DNA é um processo espontâneo que ocorre independentemente da ação de enzimas específicas.
A metilação do DNA ocorre exclusivamente em resíduos de adenina em eucariotos, sendo responsável pela alteração direta da sequência de bases do DNA.
A metilação do DNA promove sempre mutações permanentes na sequência genética do organismo.
A regulação da expressão gênica permite que as células respondam a estímulos ambientais e coordenem o desenvolvimento tecidual através de mecanismos transcricionais e epigenéticos. Acerca do assunto, registre V, para as afirmativas verdadeiras, e F, para as falsas:
( )O operon lac é um sistema induzível em bactérias onde a presença de lactose inativa o repressor, permitindo a transcrição dos genes para o metabolismo do açúcar.
( )A acetilação das histonas promove a compactação da cromatina em heterocromatina, dificultando o acesso da RNA polimerase aos promotores gênicos.
( )A metilação do DNA em ilhas CpG está frequentemente associada ao silenciamento gênico e à manutenção de padrões de expressão estáveis durante a diferenciação.
( )Os fatores de transcrição são moléculas de RNA de interferência que degradam o DNA nuclear antes do início da síntese proteica em células somáticas.
Após análise, assinale a alternativa que apresenta a sequência correta dos itens acima, de cima para baixo:
V, F, V, F.
F, F, V, F.
F, V, V, F.
V, V, F, V.
V, F, V, V.
A área da biologia molecular que estuda o conjunto total de proteínas expressas por uma célula, tecido ou organismo em um determinado momento e condição fisiológica é denominada de
Genômica.
Transcriptômica.
Proteômica.
Metagenômica.