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Dentre as estratégias de transformação genética de plantas, o sistema baseado na utilização da bactéria de solo Agrobacterium tumefaciens se destaca pela sua altaeficiência e relativa simplicidade. Na natureza esta bactéria apresenta um plasmídeo que contém todos os componentes necessários para o processo de transferência de DNA para a célula vegetal (plamídeo Ti). São essenciais para esse processo:
as bordas de repetição direta que flanqueiam o T-DNA e genes de resistência a antibióticos codificados pelo plasmídeo Ti;
os genes de virulência (genes VIR) e os genes de metabolismo de hormônios localizados na região a ser transferida;
genes de biossíntese de hormônios vegetais localizados na região a ser transferida e as proteínas de ligação a DNA codificadas por alguns dos genes de virulência;
as bordas de repetição direta que flanqueiam o T-DNA e os genes de virulência da região VIR.
Com o objetivo de analisar a qualidade e quantidade do DNA plasmidial purificado em um laboratório, um pesquisador usou a técnica de separação de DNA através de eletroforese em gel de agarose. São utilizadas para esta análise as seguintes propriedades da molécula:
estrutura em dupla hélice e carga;
teor de açúcar e tamanho;
carga negativa e tamanho molecular;
percentual de bases C e G e carga positiva;
presença de desoxiribose e estrutura em dupla hélice.
Interessado em estudar a tradução de um gene, um pesquisador introduziu as seguintes mutações pontuais em diferentes regiões do gene em estudo:
I - retirada de uma base na região 5' não traduzida;
II - retirada de uma base na região codificante;
III - troca do nucleotídeo A do primeiro códon ATG por uma base C.
Ao se analisar a produção da proteína em questão, os resultados esperados são, respectivamente:
tradução correta, tradução correta e tradução anormal;
não ocorrerá tradução, tradução anormal e tradução correta;
não ocorrerá tradução em nenhuma das três situações;
tradução correta, não ocorrerá tradução e tradução correta;
tradução correta, tradução anormal, não haverá tradução.
sítio P vazio, sítio A ocupado e presença de ATP
sítio P ocupado e sítio A vazio e ausência de GTP;
sítios P e A ocupados e presença de GTP;
sítio P e A vazios e presença de GTP;
Em protocolos de seqüenciamento de DNA a introdução de 7-deaza-citidina é necessária sempre que a seqüência a ser determinada:
for maior do que 400 pares de base;
for rica em nucleotídeos G e C;
apresentar um conteúdo A/T maior que 70%;
estiver muito próxima ao oligonucleotídeo iniciador da síntese;
estiver sendo realizada através do método químico.
O sistema Duplo Híbrido (Two-hybrid system) é uma técnica para a identificação e isolamento de genes que vem sendo largamente utilizada para a identificação de novos genes e redes regulatórias. O desenvolvimento desta técnica se encontra baseado na:
interação antígeno-anticorpo;
interação proteína-proteína que ocorre com os fatores de transcrição;
ribonucleotídeos trifosfatados, cloreto de magnésio e formamida;
DNA polimerase, dideoxinucleotídeos trifosfatados e nucleotídeos marcados
formamida, DNA ligase e dideoxinucleotídeos trifosfatados;
cloreto de magnésio, nucleotídeos trifosfatados e ribonucleotídeos marcados
DNA polimerase, ribonucleotídeos trifosfatados marcados e DNA ligase.
São características essenciais de um vetor de clonagem a presença de:
um sítio de recombinação, genes para mobilização e sítios únicos de restrição para clonagem;
uma origem de replicação, uma seqüência promotora e um gene de seleção;
uma origem de replicação, um gene de seleção e sítios únicos de restrição para clonagem;
uma origem de replicação, genes para mobilização e um gene de seleção;
uma seqüência promotora, um sítio de recombinação e genes para mobilização.