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Durante a replicação do DNA, diversas enzimas e proteínas atuam de maneira coordenada e com funções específicas para garantir a duplicação fiel do material genético.
Considerando as funções descritas a seguir:
I. Síntese de novas fitas de DNA a partir de precursores nucleotídicos.
II. Desenrolamento da dupla hélice do DNA.
III. Separação inicial das cadeias nas origens de replicação.
IV. Estabilização das fitas simples de DNA durante o processo replicativo.
V. Prevenção do superenovelamento do DNA à frente da forquilha de replicação.
Associe CORRETAMENTE cada função às respectivas enzimas ou proteínas:
( ) Helicase
( ) DNA-topoisomerases
( ) Proteínas SSP (single strand proteins)
( ) DNA-polimerases
( ) DnaA
A alternativa que apresenta a associação CORRETA, na ordem apresentada, é:
II – V – III – IV – I.
II – I – III – V – IV.
I – II – V – IV – III.
III – V – I – IV – II.
II – V – IV – I – III.
Durante a investigação de um crime, peritos coletaram um fio de cabelo sem bulbo encontrado na cena.
Considerando as técnicas de biologia molecular utilizadas em análises forenses, o método mais adequado para tentar identificar o indivíduo ao qual o cabelo pertence, é a
aplicação da PCR convencional para amplificar o DNA nuclear da amostra.
análise do DNA mitocondrial por meio de PCR e sequenciamento.
separação das proteínas do cabelo por eletroforese em gel de poliacrilamida.
avaliação da expressão gênica por quantificação de RNA mensageiro.
investigação dos compostos lipídicos da cutícula capilar por cromatografia.
A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é uma técnica molecular utilizada para amplificar in vitro segmentos específicos de DNA, gerando bilhões de cópias para estudos detalhados. No diagnóstico fitopatológico, a etapa que determina a exatidão e a especificidade do ensaio é a escolha correta dos primers (iniciadores).
Sobre a função e as características desses primers na reação, assinale a alternativa CORRETA.
Os primers são consumidos apenas no primeiro ciclo da PCR, servindo de molde para os ciclos subsequentes.
A temperatura de anelamento dos primers independe da sua composição de bases nitrogenadas.
Sua principal função é atuar como enzima catalisadora, ligando os desoxirribonucleotídeos trifosfatos (dNTPs) na fita molde.
São sequências curtas de RNA de fita simples que se ligam aleatoriamente a qualquer região do genoma do hospedeiro para iniciar a síntese.
Devem ser desenhados em pares (forward e reverse), flanqueando a região do DNA do patógeno que se deseja amplificar.
Um laboratório especializado em diagnóstico molecular vegetal recebeu amostras foliares suspeitas de infecção por vírus RNA. O técnico responsável precisava garantir que o material genético extraído permanecesse íntegro até o momento da análise molecular. Para isso, foram adotadas medidas relacionadas ao armazenamento e conservação das amostras. Assinale a alternativa que apresenta a temperatura mais adequada de armazenamento a longo prazo (meses e anos) para garantir a integridade do RNA total extraído para aplicações como RT-PCR e sequenciamento.
-80 °C.
10°C.
25 a 30°C.
37 °C.
4 °C
A tecnologia do DNA recombinante permitiu o isolamento, a clonagem e a introdução de genes em diferentes organismos, possibilitando o desenvolvimento da engenharia genética e a produção de organismos transgênicos. Com base nos conceitos, técnicas e aplicações da engenharia genética, assinale a opção correta.
A engenharia genética corresponde à utilização de técnicas de mutagênese aleatória, sem o emprego de vetores, sendo restrita à modificação de genomas bacterianos.
A clonagem gênica clássica consiste na introdução direta de genes eucarióticos em células animais, dispensando sua amplificação prévia em organismos hospedeiros.
A utilização de plasmídios e bacteriófagos como vetores permite a clonagem de genes, que são introduzidos em células bacterianas, onde se replicam juntamente com o DNA do hospedeiro.
Um organismo transgênico é definido como aquele que apresenta apenas genes endógenos modificados por mutações espontâneas ou induzidas.
A engenharia genética limita-se à caracterização de sequências de DNA, não permitindo a alteração do genótipo e do fenótipo de um organismo.
Uma macromolécula isolada de células eucarióticas apresentou as seguintes características experimentais:
I. é um polímero linear formado por ligações fosfodiéster;
II. apresenta absorção máxima em 260 nm no espectrofotômetro;
III. mantém carga elétrica negativa em pH fisiológico, devido à presença de grupos ionizáveis repetitivos.
Com base nessas propriedades estruturais e físico-químicas, conclui-se que a biomolécula isolada
é uma proteína ácida com elevada quantidade de resíduos fosforilados.
trata-se de um polímero proteico associado a cofatores nucleotídicos.
é um lipídeo complexo com cabeça polar carregada negativamente.
corresponde a um polissacarídeo estrutural com grupos sulfato ionizáveis.
pertence à classe dos ácidos nucleicos, podendo corresponder tanto a DNA quanto a RNA.
Vetores não virais vêm sendo otimizados por nanotecnologia para superar limitações de eficiência na transfecção gênica. Sobre vetores não virais baseados em nanopartículas, marque a opção correta.
Apresentam maior eficiência de transdução que vetores virais, sendo padrão ouro clínico.
Permitem transporte de grandes cargas genéticas e apresentam menor imunogenicidade relativa.
São incapazes de atravessar membranas celulares sem mecanismos ativos dependentes de vírus.
Possuem integração genômica obrigatória, garantindo expressão duradoura.
Nas modificações epigenéticas no DNA (ácido desoxirribonucleico) há
alteração da sequência do DNA.
mudanças de bases nitrogenadas.
mutações cromossômicas.
metilação do DNA.
Ao ingressar em um laboratório de procedimentos microbiológicos, o técnico de laboratório recebeu o treinamento adequado. Após esse período foi orientado a realizar a extração de DNA da bactéria Bacillus subtilis, utilizando as instruções descritas no Protocolo Operacional Padrão (POP). Sobre o POP é correto afirmar que:
É facultativo aos usuários do laboratório, incluindo o técnico, realizar os procedimentos seguindo o POP.
O POP deverá ter várias versões vigentes de um mesmo procedimento, ficando a critério do técnico a escolha de qual versão usar.
O POP deverá conter informações claras e inequívocas com revisão periódica, que permitam a execução de um procedimento técnico.
Para ter acesso ao POP de determinado procedimento é necessário aos usuários do laboratório a solicitação prévia do documento ao gestor do laboratório.
Durante a replicação do DNA, a enzima DNA polimerase catalisa a síntese das novas cadeias utilizando as fitas parentais como molde. Esse processo apresenta características específicas relacionadas à direção da síntese, à necessidade de um iniciador e à correção de erros durante a incorporação de nucleotídeos. Considerando as propriedades moleculares da DNA polimerase e o mecanismo de replicação do DNA, assinale a alternativa CORRETA.
A síntese de DNA ocorre no sentido 3' → 5', pois a enzima DNA polimerase necessita de uma extremidade 5' livre para adicionar novos nucleotídeos.
A DNA polimerase inicia a síntese de DNA diretamente sobre a fita molde e adiciona nucleotídeos na extremidade 5' da cadeia em crescimento.
A DNA polimerase reconhece erros durante a replicação, mas não possui capacidade de removê-los, sendo essa função exclusiva de outras enzimas do sistema replicativo.
A replicação semiconservativa caracteriza-se pela formação de duas moléculas-filhas compostas apenas por cadeias recém-sintetizadas.
A DNA polimerase adiciona nucleotídeos na extremidade 3' da cadeia em formação, razão pela qual a síntese da nova fita ocorre no sentido 5' → 3'.
A metilação do DNA consiste em uma modificação química que ocorre em determinadas bases nitrogenadas, podendo influenciar a expressão gênica sem alterar a sequência de nucleotídeos do DNA. Com base nesse processo, assinale a alternativa CORRETA.
Em células procarióticas, a metilação ocorre apenas em resíduos de citosina, não sendo observada em adenina.
Em células eucarióticas, a metilação do DNA ocorre predominantemente em resíduos de citosina, formando a 5-metilcitosina.
A metilação do DNA é um processo espontâneo que ocorre independentemente da ação de enzimas específicas.
A metilação do DNA ocorre exclusivamente em resíduos de adenina em eucariotos, sendo responsável pela alteração direta da sequência de bases do DNA.
A metilação do DNA promove sempre mutações permanentes na sequência genética do organismo.
A regulação da expressão gênica permite que as células respondam a estímulos ambientais e coordenem o desenvolvimento tecidual através de mecanismos transcricionais e epigenéticos. Acerca do assunto, registre V, para as afirmativas verdadeiras, e F, para as falsas:
( )O operon lac é um sistema induzível em bactérias onde a presença de lactose inativa o repressor, permitindo a transcrição dos genes para o metabolismo do açúcar.
( )A acetilação das histonas promove a compactação da cromatina em heterocromatina, dificultando o acesso da RNA polimerase aos promotores gênicos.
( )A metilação do DNA em ilhas CpG está frequentemente associada ao silenciamento gênico e à manutenção de padrões de expressão estáveis durante a diferenciação.
( )Os fatores de transcrição são moléculas de RNA de interferência que degradam o DNA nuclear antes do início da síntese proteica em células somáticas.
Após análise, assinale a alternativa que apresenta a sequência correta dos itens acima, de cima para baixo:
V, F, V, F.
F, F, V, F.
F, V, V, F.
V, V, F, V.
V, F, V, V.
A área da biologia molecular que estuda o conjunto total de proteínas expressas por uma célula, tecido ou organismo em um determinado momento e condição fisiológica é denominada de
Genômica.
Transcriptômica.
Proteômica.
Metagenômica.
Uma molécula de DNA é constituída por 800 pares de nucleotídeos. Considerando que 20% desses nucleotídeos são constituídos por uma base nitrogenada púrica que se estabiliza com 2 pontes de hidrogênio, determine a quantidade total de guaninas e pontes de hidrogênio dessa molécula de DNA, respectivamente, e assinale a alternativa correta.
480 e 2080.
240 e 1040.
120 e 1040.
80 e 640.
640 e 1440.
A etapa de precipitação do DNA é fundamental para concentrar e dessalinizar os ácidos nucleicos. O uso de álcoois como etanol e isopropanol desidrata o DNA, tornando-o insolúvel e permitindo que ele se aglomere e forme um pellet após a centrifugação. Sobre essa etapa, é CORRETO afirmar que
a adição de álcool rompe as ligações de hidrogênio da fita de DNA, facilitando a sua solubilização antes da centrifugação.
a adição desses álcoois aumenta a constante dielétrica da solução, facilitando a solubilidade do DNA.
o álcool deve estar a 55℃ para facilitar a dissolução das proteínas remanescentes.
o etanol é a melhor opção para precipitar DNA em grandes volumes, pois exige um volume de álcool significativamente menor que o isopropanol.
o etanol 70% é utilizado na lavagem final para remover sais residuais do pellet de DNA.
Em um laboratório de biologia molecular, um técnico precisava preparar uma solução Tris-EDTA, frequentemente utilizada para armazenamento e conservação de DNA. Como o desempenho da solução depende do ajuste adequado do pH, foi necessário realizar previamente a calibração do pHmetro de bancada para garantir maior confiabilidade das medições durante o preparo da solução.
Com relação ao processo de calibração correta do pHmetro, assinale a alternativa CORRETA.
O eletrodo deve ser enxaguado com água destilada entre as soluções tampão utilizadas durante a calibração, evitando interferências causadas por resíduos da solução tampão anterior.
A sequência de calibração pode ser realizada utilizando soluções tampão em qualquer ordem, pois a sequência não interfere na confiabilidade do ajuste do equipamento.
A utilização de uma única solução tampão é suficiente para qualquer situação analítica, independentemente da faixa de pH esperada na solução preparada.
A utilização das soluções tampão tem apenas a finalidade de verificar o funcionamento do eletrodo, não participando do ajuste do equipamento.
O procedimento de calibração elimina a necessidade de considerar fatores relacionados à temperatura durante a realização das medições.
Protocolos de extração de DNA exigem o cumprimento de etapas e procedimentos que objetivam obter o conteúdo íntegro e sem contaminações adicionais. Identificar a opção que descreve uma ação correta nestes procedimentos.
A centrifugação é uma técnica necessária no processo de extração de DNA.
O manuseio de amostras de DNA não exige uso de luvas ou plásticos descartáveis.
Assim como ocorre para a extração de proteínas, a lise celular não é necessária para a extração de DNA.
A insolubilidade do DNA em água permite a sua extração facilitada do meio celular por meio de precipitação.
Miller e Urey validaram o modelo de evolução molecular de Oparin e Haldane ao realizarem um experimento onde aminoácidos foram sintetizados por meio de descargas elétricas em um ambiente gasoso isolado. O teste demonstrou que as condições ambientais da Terra primitiva seriam favoráveis à transição da matéria inorgânica para as primeiras moléculas orgânicas.
No experimento de Miller e Urey, foram usados
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A técnica de flow chip é um método molecular de detecção de sequências específicas de DNA em amostras usando um chip com membrana de nylon. É um método rápido para rastreamento de múltiplos patógenos simultaneamente em amostras e útil, pois é executado em poucas horas até o resultado. Quais metodologias existem nesse teste e como elas são utilizadas?
Amplificação do DNA por PCR seguida de hibridização reversa do DNA amplificado com sondas específicas (já imobilizadas na membrana do chip) que levam a uma reação colorimétrica caso as sondas se liguem ao DNA.
Amplificação por PCR em tempo real, seguida por emissão de fluorescência das sondas específicas para cada patógeno analisado; as sondas são imobilizadas no chip, onde a fluorescência é detectada.
Imobilização de anticorpos contra sequências específicas de DNA de patógenos na membrana do chip, com reação caso haja amplificação do DNA do patógeno na amostra do paciente.
Reação de amplificação isotérmica do DNA, acoplada com uma hibridização reversa do DNA, que utiliza sondas específicas já imobilizadas na membrana do chip; a visualização é colorimétrica, caso as sondas se liguem ao DNA amplificado.
Em discussão sobre material genético, o professor pergunta como o DNA relaciona-se com características herdadas e com o funcionamento das células. Marque a afirmação que apresenta uma visão CORRETA desse papel.
O DNA fica espalhado no citoplasma, participa de reações energéticas e cumpre função semelhante à do ATP em vários tecidos.
A molécula de DNA atua como reserva central de sais minerais, que se acumulam para uso posterior em reações metabólicas.
O DNA atua apenas em células germinativas, apresenta pouca ligação com atividades de tecidos presentes em outras regiões do corpo.
Em organismos multicelulares, células sanguíneas carecem de DNA, o que limita o uso desse tecido em identificação genética
O DNA guarda informações genéticas, organiza-se em cromossomos, duplica-se em divisões celulares e orienta a síntese de moléculas ligadas a características herdadas.