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A técnica de Western blotting é uma técnica muito importante quando se deseja detectar, analisar e quantificar proteínas. A respeito das etapas dessa técnica, constata-se o seguinte:
a revelação só pode ser feita por fluorescência.
a detecção da proteína se dá pela exposição a anticorpos específicos.
a separação das proteínas é feita por massa molecular em membrana de poliacrilamida.
a eletroforese em gel de agarose permite a separação das proteínas por tamanho molecular.
a transferência das proteínas do gel de agarose é realizada para uma membrana de nitrocelulose.
Durante a criopreservação celular embrionária, alguns procedimentos são fundamentais para garantir sucesso, dentre eles a indução da cristalização, que tem como objetivo evitar risco de
favorecer a hidratação celular no momento da imersão no nitrogênio líquido.
ultrapassar a parte de solidificação da solução utilizada.
comprometer o descongelamento da célula.
alterar o pré-resfriamento do meio.
alterar o pH da solução.
Um estudante de iniciação científica precisa fazer o fracionamento de uma amostra por centrifugação. No laboratório há um equipamento com duas opções, g ou rpm. Sobre estas unidades de medida, verifica-se o seguinte:
se a velocidade de centrifugação está descrita em rpm, ela somente poderá ser utilizada de uma centrífuga para outra se as centrífugas em questão tiverem o mesmo tamanho de raio e mesmo ângulo de inclinação do rotor.
rpm significa rotações por minuto; nesse caso, o número de giros está relacionado com a aceleração do rotor da centrífuga.
g significa Força G (Força Gravitacional); nesse caso, a velocidade do rotor é influenciada pela massa da amostra.
se a velocidade de centrifugação está descrita em g, ela somente poderá ser utilizada de uma centrífuga para outra se as centrífugas em questão tiverem o mesmo tamanho de raio e mesmo ângulo de inclinação do rotor.
rpm significa rotações por minuto; nesse caso, a velocidade do rotor está associada ao número de giros por minuto, sendo que o tamanho do rotor não influencia na velocidade.
Durante a operação do microscópio óptico é comum o uso do óleo de imersão para visualização de estruturas no aumento de 1000x. Qual é o procedimento correto após o uso do óleo de imersão?
Limpar suavemente a lente objetiva com papel de óptica ou papel macio em um único sentido; caso o óleo de imersão seque na objetiva, deve-se limpar com solução álcool-cetona (7:3).
Limpar a lente objetiva com papel macio e seco, passando o mesmo rapidamente sobre a superfície da lente em movimentos de zigue-zague.
Limpar a lente objetiva com papel umedecido em água.
Limpar a lente objetiva com papel filtro umedecida em etanol 70%.
Desmontar a lente ocular e limpar a objetiva com haste flexível com ponta de algodão umedecida em água.
Ao preparar um experimento, o pesquisador deve utilizar alguns princípios básicos para que os dados, ao serem obtidos, permitam uma análise correta e levem a conclusões válidas em relação ao problema em estudo. Por essa razão é recomendado que o desenho experimental possua réplicas biológicas e experimentais (ou técnicas). A este respeito, verifica-se o seguinte:
a réplica biológica consiste em realizar três vezes a medida do experimento e calcular o valor médio dessas medidas para minimizar o efeito do ambiente na resposta ao tratamento
deve-se priorizar a realização da réplica experimental em relação à biológica porque organismos da mesma espécie responderão sempre da mesma forma aos tratamentos.
a necessidade de utilizar réplicas quando se faz experimentação com animais é variável, se optar por fazer réplicas biológicas não é necessário utilizar réplica experimental.
as réplicas experimentais são usadas para avaliar a variabilidade gerada pelo pesquisador e pelo ambiente durante a execução do experimento; já as réplicas biológicas são utilizadas para diminuir o efeito da variabilidade do organismo ao tratamento.
para melhorar a precisão dos experimentos, todas as medidas devem ser realizadas de uma só vez com triplicada biológica.