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Para avaliar a expressão de genes relacionados à...
Para avaliar a expressão de genes relacionados à competência oocitária em bovinos é necessária a extração de RNA de alta qualidade de amostras extremamente limitadas, como os oócitos e células do cumulus oophorus. Considerando o alto conteúdo de lipídeos e proteínas presentes e a alta atividade de Ribonucleases (RNases) nestes tipos celulares, assinale a alternativa que apresenta o melhor protocolo de extração a fim de minimizar a degradação do material e maximizar o rendimento de RNA íntegro e livre de contaminantes.
A
Amostras ricas em lipídios, como oócitos e embriões, exigem o uso de reagentes que combinem agentes caotrópicos e fases de purificação, a fim de remover contaminantes lipídicos e proteicos.
B
A utilização de protocolos baseados em extração por solventes orgânicos, como fenol-clorofórmio, é suficiente para garantir RNA de alta pureza, dispensando etapas de purificação adicionais.
C
A adição de DNase durante o protocolo de extração é suficiente para garantir RNA livre de contaminantes e de alta integridade, considerando que RNA e DNA são moléculas estruturalmente semelhantes.
D
A presença de contaminantes como proteínas ou solventes residuais não interfere nas etapas subsequentes de análise de expressão gênica, desde que a concentração de RNA esteja acima de 50 ng/µL.
E
A obtenção de RNA de células ricas em proteínas e lipídeos não requer protocolos específicos, visto que esta característica não interfere nos métodos atuais de extração.