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As enzimas de restrição são ferramentas biotecnológicas utilizadas em técnicas de biologia molecular e foram descobertas em bactérias que produziam enzimas que seccionavam o DNA viral, gerando resistência à infecção por bacteriófagos. As enzimas de restrição reconhecem determinadas sequências nucleotídicas do DNA e fragmentam a molécula sempre que identificam essa sequência. Elas atuam
identificando determinadas sequências específicas e clivando as ligações entre o grupo hidroxila 3’ de um nucleotídeo e o grupo fosfato 5’ do nucleotídeo adjacente.
como exonucleases, clivando nucleotídeos do DNA alvo nas extremidades livres.
como endonucleases, pela interação dos aminoácidos do sítio de ligação e as ligações de hidrogênio entre as bases nitrogenadas.
adicionando novos nucleotídeos às sequências coesivas de quatro a seis nucleotídeos, a partir da extremidade 5’ do grupamento fosfato.
como ligases em experimentos de clonagem de DNA, para a inserção de sequências gênicas em plasmídeos bacterianos.