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Uma pesquisadora deseja preparar uma biblioteca de DNA para realizar um sequenciamento genético utilizando a tecnologia de sequenciamento de próxima geração (NextGeneration Sequencing, NGS). O objetivo é garantir uma cobertura uniforme do genoma e minimizar vieses que possam impactar a análise. A pesquisadora deve tomar decisões sobre o protocolo de preparação de biblioteca. Assinale a alternativa que apresenta o passo correto e essencial para garantir a qualidade da biblioteca para NGS.
Adicionar adaptadores ao DNA sem realizar a fragmentação prévia do material genético.
Realizar a fragmentação do DNA em tamanhos uniformes e, em seguida, adicionar adaptadores específicos para o sequenciamento.
Evitar a etapa de purificação, pois resíduos de reagentes não interferem no sequenciamento.
Utilizar exclusivamente RNA como material inicial, mesmo que o objetivo seja sequenciar o DNA genômico.
Realizar a amplificação da biblioteca com um número excessivo de ciclos de PCR para aumentar o rendimento final.