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A etapa de descoloração no procedimento da coloração de Gram tem como objetivo:
remover a camada de peptideoglicano das bactérias;
fixar as bactérias na lâmina de vidro;
permitir que o corante de contraste adira às células bacterianas;
remover o corante violeta das bactérias Gram-negativas;
realçar a aderência das bactérias à lâmina de vidro.