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A análise de DNA por eletroforese é um método analítico e preparativo fundamental nos laboratórios de pesquisa e de diagnóstico. Sobre o princípio do método é correto afirmar:
A mobilidade eletroforética do DNA através do gel é influenciada apenas pelo tamanho e conformação da molécula.
Para a separação de moléculas de DNA maiores que 50 kb é recomendado o uso de eletroforese em gel de campo pulsado (pulsed field).
O tipo de matriz usada depende do tamanho dos fragmentos de DNA sendo a matriz de poliacrilamida mais utilizada para separar fragmentos maiores.
A estrutura necessária para a eletroforese vertical e horizontal consiste em uma fonte de tensão, uma unidade de eletroforese e uma câmera para digitalização.
O princípio se baseia no fato de biomoléculas com carga negativa quando aplicadas ou imersas em uma matriz de gel e submetidas a um campo elétrico migram em direção ao polo negativo.
Comparando os princípios da PCR convencional e PCR em tempo real, pode-se afirmar corretamente:
É possível a quantificação de carga viral em ambos.
Os reagentes usados na PCR convencional e PCR em tempo real são iguais.
A etapa de manipulação das amostras pós-PCR inexiste na PCR em tempo real.
A PCR em tempo real usa a mesma plataforma de instrumentos que a PCR convencional.
Os dados gerados na PCR em tempo real são mais precisos e obtidos no mesmo período de tempo que a PCR convencional.
São diversas as técnicas para os estudos de expressão gênica. Algumas dessas estão listadas abaixo. Para cada técnica listada abaixo, uma descrição é fornecida. Assinale a alternativa que possui a descrição correta da técnica.
Microarranjo de DNA: método de sequenciamento de cDNA de alto desempenho baseado no sequenciamento de transcritos.
Bibliotecas de EST: é o método de sequenciamento de cDNA de alto desempenho, baseado no sequenciamento direto de transcritos.
RNA – seq: são sequências ou etiquetas (tags) de leitura simples produzidas a partir do sequenciamento parcial de uma biblioteca de cDNA.
Análise serial da expressão gênica (SAGE): consiste em um arranjo de moléculas de DNA de fita simples, denominadas sondas, quimicamente ligadas a uma superfície sólida, os “chips”.
Hibridização subtrativa supressiva (SSH): consiste na hidrização de uma amostra de cDNA de interesse (tester) com um excesso de cDNA fita simples de outra amostra contrastante (driver).
O termo ‘boas práticas de laboratório’ (BPL) tem sua origem na indústria farmacêutica, na década de 1960. BPL são técnicas, normas e procedimentos aplicados aos processos laboratoriais, visando a obtenção da qualidade. Abaixo, são descritos exemplos de normas, técnicas e procedimentos que proporcionam segurança nas atividades diárias dos trabalhadores, facilitando a rotina de trabalho.
Tenha cuidado ao apanhar cacos de vidro diretamente com as mãos ou pano.
Faça a limpeza regular em banho-maria, a fim de evitar a multiplicação de microrganismos.
Na busca por maior tranquilidade e concentração, é recomendável trabalhar sozinho, as vezes até mesmo a noite, no laboratório.
A cabine de segurança biológica (CSB) pode ser considerado um local apropriado para armazenamento de objetos, devido ao seu ambiente protegido de contaminantes.
É expressamente proibido pipetar com a boca qualquer produto químico, com exceção apenas da água, por ser inerte.
A regulação da expressão gênica é muito importante, estando envolvida tanto no processo para a transformação de bactérias em cepas resistentes, quanto no controle de processos vitais em todos os organismos. Sobre a expressão gênica, é correto afirmar que:
Em células bacterianas, um gene regulador ajuda a controlar a transcrição do óperon.
Em células bacterianas, o DNA deve desenrolar-se parcialmente das proteínas histona para que possa haver transcrição.
Os genes regulatórios codificam proteínas usadas no metabolismo ou na biossíntese ou que tem papel estrutural na célula.
A maioria dos genes eucarióticos é organizada em óperons e frequentemente é transcrita em uma única molécula de mRNA.
Os genes constitutivos são aqueles cujos produtos – RNA ou proteínas – interagem com outras sequências e afetam a transcrição ou a tradução dessas sequências.
Sobre a reação de sequenciamento (cycle sequencing), assinale a alternativa correta.
Na reação de sequenciamento, são utilizados os primers forward e reverse.
Nessa técnica, um primer curto aleatório é utilizado para anelar com um segmento complementar ao DNA.
A reação de sequenciamento é baseada no método de terminação de cadeia de dideoxinucleotídeo de Sanger.
Na reação de sequenciamento, sucessivos ciclos de desnaturação, anelamento e síntese resultam em uma amplificação do produto como em reação em cadeia.
Uma diferença dessa técnica em relação à da reação em cadeia da polimerase (PCR) é que, na reação de sequenciamento, o dideoxinucleotídeo (ddNTP) é usado, ao invés do deoxinucleotídeo (dNTP).
Sobre a técnica de sequenciamento automático de DNA, é correto afirmar que:
uma das etapas prévias ao sequenciamento baseado no método de Sanger é a clonagem.
no método de Sanger, o sequenciamento de DNA se baseia no uso de modificações de bases específicas e reações de clivagem.
a maioria dos sequenciadores automáticos usam o método Sanger de sequenciamento com fragmentos de DNA marcados radioativamente.
nos sequenciadores automáticos em que os fragmentos de DNA são detectados durante eletroforese, a passagem dos fragmentos é registrada por um laser móvel.
apesar de ser, atualmente, uma técnica rotineira, até meados da década de 1970, apenas sequências de 15-20 pares de base haviam sido sequenciadas.
Sobre a temperatura de pareamento (temperatura de melting T m) dos iniciadores em uma reação de amplificação de DNA por PCR, marque a alternativa correta.
Somente o tamanho dos iniciadores tem influência sobre a T m.
Depende unicamente do conteúdo de ligações AT nos iniciadores.
A composição de bases e tamanho dos iniciadores influenciam a T m.
As fórmulas para calcular a Tm podem ser divididas em básicas, dependentes do conteúdo de GC e baseadas na termodinâmica.
Corresponde a temperatura na qual se obtém a maior formação de híbridos gerados pelo estabelecimento de pontes de hidrogênio entre os nucleotídeos complementares.
Sobre os marcadores de microssatélites usados para acessar a variabilidade genética em populações naturais ou cativas, é correto afirmar:
não podem ser amplificados individualmente através de PCR.
encontram-se distribuídos ao acaso no genoma, com baixa frequência de ocorrência.
De acordo com sua composição são classificados em perfeitos, imperfeitos, interrompidos ou degenerados.
são sequências curtas repetidas lado a lado e distribuídas em padrão determinado no genoma dos eucariotos.
apresentam alto grau de polimorfismo devido a sua natureza altamente repetitiva e da pequena extensão da unidade de repetição.
Na cadeia produtiva do pescado, as etapas iniciais na linha de processamento são fundamentais para a obtenção de um produto final de boa qualidade. Para a redução do processo de multiplicação dos microrganismos, todo o procedimento deve ser realizado de forma rápida seguindo-se um sistema de controle de qualidade. Então, com o intuito de se obter um produto final adequado ao consumo humano a água utilizada em todas as etapas do processamento deverá
ser clorada com 5,0 μg . L−1 de hipoclorito de sódio.
ser corrente e conter 5,0 mg . L−1 de hipoclorito de sódio.
ser corrente e conter 10 mg . L−1 de hipoclorito de sódio.
ser clorada com 5,0 mg . L−1 de hipoclorito de sódio à temperatura ambiente.
conter água sanitária comercial até a concentração de 3,0 mg . L−1 à temperatura ambiente.
O conhecimento do rendimento de todas as partes comestíveis, visando a comercialização, é necessário para evitar a geração de resíduos e melhorar o aproveitamento do pescado processado.
Diante disso, é correto afirmar:
A destreza do operador, a quantidade de gordura visceral e o tamanho da cabeça influenciam no rendimento de filé.
Dentre as espécies de água doce, o tambaqui apresenta um dos menores rendimentos de filé.
O sexo, o formato anatômico e a composição de gordura do filé influenciam no seu rendimento.
O sexo e o peso do animal não influenciam no rendimento de filé.
O cálculo do rendimento do processamento é feito somente considerando-se o peso corporal do peixe eviscerado.
Nas pisciculturas destinadas à produção comercial de alevinos e juvenis de tilápia são utilizados produtos para aplicação da técnica de reversão sexual. A forma correta de administração de tais produtos consiste de
adição de hormônio na ração fornecida às pós larvas.
adição de hormônio na água de cultivo das matrizes.
adição de hormônio feminino na ração.
adição de extrato hipofisário na ração.
injeção de hormônio nos peixes adultos.
A hibridização em peixes configura-se como uma técnica que traz vantagens zootécnicas incomparáveis para o avanço da aquicultura. No entanto, há riscos negativos que devem ser considerados e priorizados durante o manejo e gestão dos estoques pesqueiros envolvidos. Relacionado a este fato,
o Brasil junto à Israel, ocupa o primeiro ranking mundial nas pesquisas sobre hibridização de peixes.
a hibridização em peixes consiste de uma técnica biotecnológica que não ocorre em condições naturais, como em outros grupos de animais.
a hibridização intraespecífica entre as tilápias e as carpas tem sido utilizada em criações comerciais no Brasil.
o processo biotecnológico que produz indivíduos com o material genético materno é conhecido como triploidização.
o escape de híbridos e a possibilidade de cruzamentos destes com as populações selvagens pode levar à erosão da variabilidade genética encontrada nas populações naturais.
O consumo de peixe cru coloca em risco a saúde da população que desconhece os perigos associados à ingestão deste tipo de alimento.
Dentre as principais zoonoses transmitidas pelo pescado, estão incluídas:
anisaquiose, difilobotriose, lerneose.
fagicolose, clostridiose, difilobotriose.
anisaquiose, lerneose, fagicolose.
anisaquiose, fagicolose, difilobotriose.
clostridiose, lerneose, difilobotriose.
O tambaqui, Colossoma macropomum, pode atingir 1 m e pesar 30 kg. Não se reproduz espontaneamente em tanques e, como a maioria dos peixes migradores, necessita que a reprodução seja induzida com a aplicação de hormônios. Esta tecnologia tem sido aplicada com sucesso desde a década de 80. No entanto, após três décadas de uso da técnica, existe a possibilidade de
ocorrência de híbridos no plantel de reprodutores.
redução da consanguinidade dos reprodutores.
obtenção de maior proporção de tambaquis machos estéreis.
consanguinidade excessiva no plantel de reprodutores.
obtenção de maior proporção de tambaquis fêmeas estéreis.